去除核酸提取步骤
我们已经知道,大规模的核酸检测和对受到感染的患者接触过的人进行追踪,是控制新冠疫情扩展的有效手段之一。目前最常见的检测方法是使用鼻咽拭子获取样本进行基于RT-PCR的核酸检测。然而,获取鼻咽拭子样本的过程对人们来说并不是一个很舒服的过程,而且目前的核酸检测大多需要经过从样本中纯化提取核酸的步骤。这一步骤不但增加了处理样本的时间和成本,也可能因为核酸纯化试剂盒的短缺而影响新冠检测的速度。
耶鲁大学公共卫生学院的研究人员力图开发一种基于唾液样本的“简易版”新冠病毒检测。他们首先通过实验发现,在没有添加防腐剂的情况下,唾液中的新冠病毒RNA在室温和30°C情况下保存的稳定性与在4°C情况下稳定性相当。这意味着唾液样本不需要特制的样本瓶来收集,任何无菌样本瓶都可以用于收集唾液样本,为收集唾液样本提供了便利。
然后,研究人员进一步探索简化核酸检测流程的方法。他们将样本处理过程简化为将蛋白酶K(在DNA提取过程中常用的一种蛋白酶)加入样本中降解蛋白之后,直接将处理过的样本用于RT-PCR的检测流程,去除了从样本中纯化提取核酸的步骤。
研究人员的实验结果发现,基于唾液样本,去除纯化提取核酸步骤的“简易版”检测流程得出的检测结果,与基于鼻咽拭子,使用纯化提取核酸步骤的常规RT-PCR检测相比,结果相关性达到94%。
▲SalivaDirect核酸检测流程和测试表现(图片来源:参考资料[3])
扩展检测适用范围
为了让这一检测能够被更多的检测实验室使用,研究人员还使用不同厂家生产的蛋白酶K和RT-PCR试剂盒进行了测试。他们发现多种常见的蛋白酶K和RT-PCR试剂盒可以用于这一“简易版”新冠检测流程,检测灵敏度达到6-12个新冠病毒拷贝/微升。这意味着,很多检测实验室不需要购买特别的试剂,只要遵循耶鲁大学发布的检测流程,利用手边已有的试剂就可以构建这一检测。
▲经过验证适用于SalivaDirect流程的试剂和仪器(图片来源:参考资料[3])
耶鲁大学的研究人员同时表示,他们将为所有感兴趣的检测实验室提供“开源“检测流程,帮助它们提高新冠病毒检测的效率。同时他们正在进一步验证这一检测流程在发现无症状患者方面的能力。研发人员表示,针对新冠病毒的检测需要不断的创新,从而在保持检测准确性的情况下,让它们更为迅速,便捷,可及性更高,这项研究是向这一方向迈出的重要一步。